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細胞凋亡雙染試劑盒

細胞凋亡雙染試劑盒

簡要描述:

細胞凋亡雙染試劑盒(Hoechst 33342/PI Double Stain Kit)是一種采用Hoechst 33342和碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)雙染進行細胞凋亡與壞死分析的檢測試劑盒。檢測原理在於:Hoechst 33342是一種活細胞核染料,能穿透正常細胞以及凋亡細胞膜,與DNA結合(很大激發波長為350nm,發射波長為461nm

產品時間:2020-08-04

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Hoechst 33342/PI Double Stain Kit細胞凋亡雙染試劑盒

 

產品標簽

Hoechst 33342/PI凋亡檢測試劑盒JC-1膜電位檢測Annexin V-FITC/PI凋亡檢測試劑盒TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒

 

產品信息

產品名稱

產品編號

規格

價格(元)

Hoechst 33342/PI Double Stain Kit 細胞凋亡雙染試劑盒

MX3201-100T

100T

318

 

產品描述

Hoechst 33342/PI細胞凋亡雙染試劑盒(Hoechst 33342/PI Double Stain Kit)是一種采用Hoechst 33342和碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)雙染進行細胞凋亡與壞死分析的檢測試劑盒。檢測原理在於:Hoechst 33342是一種活細胞核染料,能穿透正常細胞以及凋亡細胞膜,與DNA結合(大激發波長為350nm,發射波長為461nm),呈現藍色熒光。當細胞發生凋亡,染色質發生固縮,染色後的細胞熒光比正常細胞明顯增強。而PI是一種死細胞核染料,不能穿透細胞膜,對於具完整細胞膜的正常細胞或凋亡細胞不能染色。但對於壞死細胞,由於膜的完整性喪失,PI能夠穿透進入細胞,與DNA結合(大激發波長為536nm,發射波長為617nm),呈現紅色熒光。經Hoechst 33342/PI雙染後,使用流式細胞儀或熒光顯微鏡檢測,正常細胞為弱紅色熒光+弱藍色熒光;凋亡細胞為弱紅色熒光+強藍色熒光;壞死細胞為強紅色熒光+弱藍色熒光。

本試劑盒可檢測100個樣品,每個樣本的細胞數量可為0.1~1×06

 

產品包裝

編號

組分名稱

規格

保存方法

MX3201-A

Cell Stain Buffer 細胞染色緩衝液(2×

100ml

4℃或-20℃

MX3201-B

Hoechst 33342 Stain Hoechst染色液

0.5ml

-20避光

MX3201-C

PI Stain PI染色液

0.5ml

-20避光

 

注意事項

  • 熒光染料均存在淬滅的問題,建議染色後盡快檢測
  • Hoechst 33342孵育細胞時間不宜過長,一般控製在20min內太長容易引起探針的發射光譜由藍光向紅光遷移,導致紅色熒光與藍色熒光的比例改變。
  • PI對人體有一定的刺激性,請注意適當防護。
  • 如果要進行組織的凋亡和壞死檢測,請將組織消化製備成單細胞懸液後再檢測。
  • 為了您的安全和健康,請穿實驗服並戴一次性手套操作

 

注意事項

1)本品不是臨床藥物,隻能用於科研用途,不能用於診斷或臨床用途。

2)為了您的安全和健康,請穿實驗服並戴一次性手套操作。

使用方法

一、細胞樣本製備

1.1 貼壁細胞

1.1.1 小心收集細胞培養液到一個無菌離心管內備用;

1.1.2 用胰蛋白酶消化細胞至細胞可以輕輕用移液槍或槍頭吹打下來,加入前麵收集的細胞培養液,吹打下所有貼壁細胞,並輕輕吹散細胞

1.1.3 收集上述細胞懸液到離心管內,4℃,1000g離心3~5min,使細胞沉至管底,小心吸取上清並丟棄,可留約50μl培養液,以免吸走細胞。【注意】:某些特殊細胞,如果沉澱不充分,可以適當提高離心力或者延長離心時間。

1.1.4 加入約1ml提前預冷的PBS,重懸細胞,並轉移到1.5ml無菌離心管,4℃,1000g離心3~5min,使細胞沉至管底。

1.1.5 小心吸取上清並丟棄,可留約50μl PBS,以免吸走細胞。輕輕彈擊離心管底以適當分散細胞,避免細胞成團。

1.2 懸浮細胞

1.2.1 4℃,1000g離心3~5min,使細胞沉至管底,小心吸取上清並丟棄,可留約50μl培養液,以免吸走細胞。

1.2.2 加入約1ml提前預冷的PBS,重懸細胞,並轉移到1.5ml無菌離心管,4℃,1000g離心3~5min,使細胞沉至管底。

1.2.3 小心吸取上清並丟棄,可留約50μl PBS,以免吸走細胞。輕輕彈擊離心管底以適當分散細胞,避免細胞成團。

染色前製備

2.1細胞染色緩衝液(1×)的準備:取適量細胞染色緩衝液(2×)與無菌去離子水或蒸餾水等比例混合,即為細胞染色緩衝液(1×),4℃保存備用。

2.2 細胞重懸:將上述收集好的0.1~1×06細胞,加入0.9ml 細胞染色緩衝液(1×,重懸細胞沉澱。

三、Hoechst 33342/PI雙染

3.1 加入5μl Hoechst 33342染色液,置於37℃水浴,孵育5~15min。

3.2 置於冰水冷卻,4℃,1000g離心3~5min,使細胞沉至管底,棄上層染色液。

3.3 加入0.9ml 細胞染色緩衝液(1×),重懸細胞沉澱。

3.4 加入5μl PI染色液,置於冰浴或4℃,孵育20~30min。

【注意】:也可一步法進行染色:加入5μl Hoechst 33342染色液和5μl PI染色液,輕輕混勻,置於冰浴或4℃,孵育20~30min。

四、結果分析

4.1 流式細胞儀檢測

用流式細胞儀在激發波長400~500nm處檢測藍色熒光,在>630nm處檢測紅色熒光,同時檢測光散射情況。采用適當分析軟件進行細胞DNA含量分析和光散射分析。

4.2 熒光顯微鏡檢測

檢測前4℃,1000g離心3~5min沉澱細胞,用PBS洗滌一次,再塗片觀察紅色和藍色熒光。

【注意】:對於貼壁細胞,也可不收集細胞,棄培養液後直接依次按照上述比例加入細胞染色緩衝液(1×)、Hoechst 33342染色液、PI染色液,置於冰浴或4℃,孵育20~30min。染色後PBS洗滌一次,再在熒光顯微鏡下觀察。

4.3 結果呈現

正常細胞呈低藍光/低紅光,凋亡細胞呈高藍光/低紅光;壞死細胞呈低藍光/高紅光。

 

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名稱

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細胞凋亡雙染試劑盒

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