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pH熒光探針

pH熒光探針

簡要描述:

pH熒光探針是一種細胞膜滲透性的熒光探針,用來測定相對的胞內pH變化。是常用的比率型pH探針-BCECF(2',7'-Bis-(2-Carboxyethyl)-5-(and-6)- Carboxyfluorescein)的優越替代物。

產品時間:2020-08-04

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BCFL AM (Superior replacement for BCECF AM)

pH熒光探針

 

產品關鍵詞

BCFL AM; BCECF, AM;Dual-excitation ratiometric pH indicator 雙激發光比率型pH熒光探針;SBFI AM ( Na+ Indicator)Fluo-8, AM 

 

產品信息

產品名稱

產品編號

規格

價格(元)

BCFL AM (Superior replacement for BCECF AM)

MX4552-1MG

1mg

2089

 

產品描述

BCFL AM是一種細胞膜滲透性的熒光探針,用來測定相對的胞內pH變化。是常用的比率型pH探針-BCECF(2',7'-Bis-(2-Carboxyethyl)-5-(and-6)- Carboxyfluorescein)的優越替代物。與BCECF不同(至少由三種異構體構成的一種複合物,不同異構體之間的比率因批次而異),BCFL是單一異構體,具有更好的的結果重複性。BCFL具有與BCECF相同的光譜反應(單波長測定λex/λem=490/535nm;或比率測定λex/λem=505/ 535nm和λex/λem=430/535nm)(光譜特征見附錄I)。BCFL AM表現出pH依賴的雙激發性,pKa~7.0,以及一個激發交點(454nm)。BCFL AM的比率型成像使得胞內pH測定基本不受幾種可變因素的影響,包括染料濃度、光徑、細胞泄露和光漂白率。

 

產品特性

1) 同義名:BCFL AM ester; BCFL Acetoxymethyl Ester;

2) 分子量:~600

3) 溶解性:溶於DMSO

4) Ex/Em503/528nm

 

注意事項

1熒光染料都存在淬滅問題,操作或保存過程中盡量避光,減緩熒光淬滅。

2)為了您的安全和健康,請穿實驗服並戴一次性手套操作。

 

使用方法

A、試劑準備

1. 10% Pluronic F-127母液配製【可選】

a)將1g Pluronic F-127(貨號:MS4301-1G)溶於10ml去離子水,配製成10%(w/v)母液。

b)溶解過程中於40~50℃內加熱10% Pluronic F-127母液30min,使其完全溶解。

c)10% Pluronic F-127母液室溫保存,高達6個月穩定,不要凍存。

2. HHBS Buffer(貨號:MS3510-500ML)或其他生理緩衝液

3. 丙磺舒(貨號:MZ8471-1G)或水溶性丙磺舒(貨號:MZ8472-154MG【可選】

 

B、操作步驟

【注意】:以下實驗步驟中用到非離子表麵活性劑Pluronic F-127和有機陰離子轉運抑製劑丙磺舒(Probenecid),這兩種試劑雖然都是非必需的,但強力推薦使用。

1. 製備BCFL AM母液:於實驗前,將低溫保存的BCFL AM粉末(Mw:~600)置於室溫回溫至少20min。低速離心後加入高質量無水DMSO配製成10~20mM母液。比如:1mg BCFL AM粉末加入166μl DMSO充分溶解,混勻後即得到10mM母液。多餘的母液根據單次用量分裝,避光凍存,約3個月穩定

2. 用HHBS或其他的生理緩衝液製備2×工作液(含10μM BCFL AM和0.08% Pluronic F-127),比如,在合適的管子內混合6.4μl BCFL AM(10mM 儲存液)和51.2μl 10% Pluronic F-127。之後,添加HHBS或其他生理緩衝液直到總體積為6.4ml。

【注意】:對於大部分的細胞係,建議BCFL AM的工作濃度為4~5μMPluronic F-127的終濃度建議為0.02~0.04%。

3. 吸取100μl 2×工作液到含100μl 細胞培養基的培養孔內,混勻,使得BCFL AM的終濃度為5μMPluronic F-127的終濃度為0.04%。

4. 置於37℃孵育30~60min。之後置於室溫孵育30min。

5. 吸走200μl染色液,之後重新加入含1mM丙磺舒的HHBS Buffer或其他生理緩衝液。

6. 添加化合物到檢測孔內。之後通過熒光檢測來進行pH分析。【單波長檢測:Ex/Em=490/535nm(cutoff=515nm);或比率測定Ex/Em=505/535nm和430/535nm(cutoff=515nm)】

 

相關產品

貨號

名稱

規格

MX4551-1MG

BCECF Acid, Cell Impermeant pH熒光探針

1mg

MX4501-1MG

BCECF AM, Cell Permeant pH熒光探針

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5mg

 

 

附錄 BCFL探針pH依賴性的光譜特征。A)吸收光譜;B)發射光譜;C)激發光譜;圖A)表明BCFL在pH4.5-9.0範圍內的吸收光譜往紅光遷移(450nm→505nm),且摩爾吸光係數增加到約90,000 cm-1M-1,反映了BCFL具pH敏感性的吸收特征。圖B)表明BCFL在生理pH6-8範圍內的發射光譜。與BCECF相似,BCFL在生理範圍內的發射波長為526nm。圖C)說明BCFL作為雙激發比率型pH指示劑,具有激發等消光點(430nm)

 

 

 

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio香蕉视频app官方网站入口所有】

 

 

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