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AO/EB雙染試劑盒

AO/EB雙染試劑盒

簡要描述:

AO/EB雙染試劑盒吖啶橙(Acridine Orange,AO)是一種異染的核酸結合染料,具細胞膜滲透性,通過插入或靜電吸引的方式與DNA或RNA結合。當與雙鏈DNA(dsDNA)結合發射綠色熒光(Ex/Em=502/525nm),與單鏈DNA(ssDNA)或RNA結合發射紅色熒光(Ex/Em=460/650nm),少量結合呈橙紅色熒光。

產品時間:2020-07-28

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AO/EB Double Staining Kit AO/EB雙染試劑盒

 

關鍵詞:

吖啶橙Acridine Orange,AO溴化乙錠(Ethidium Bromide, EB)Apoptotic cell 凋亡細胞;Necrotic cells壞死細胞;Annexin V/PI 細胞凋亡雙染; 

 

產品信息

產品名稱

產品編號

規格

價格(元)

AO/EB Double Staining Kit AO/EB雙染試劑盒

MX3249-100T

100T

180

產品描述

吖啶橙Acridine Orange,AO)是一種異染的核酸結合染料,具細胞膜滲透性,通過插入或靜電吸引的方式與DNA或RNA結合。當與雙鏈DNA(dsDNA)結合發射綠色熒光(Ex/Em=502/525nm),與單鏈DNA(ssDNA)或RNA結合發射紅色熒光(Ex/Em=460/650nm),少量結合呈橙紅色熒光。溴化乙錠(Ethidium Bromide, EB)是一種多環芳烴熒光小分子和核酸插入劑,嵌合到雙鏈DNA或RNA的堿基對內,無堿基特異性,呈紅色熒光((Ex/Em=518/605nm)。EB不具細胞膜滲透性。

吖啶橙(AO和溴化乙錠(EB)常常聯合使用來觀察細胞核變化和凋亡小體形成,這些都是凋亡的特征。兩者結合能區分活細胞、凋亡細胞和壞死細胞。工作原理在於吖啶橙能同時染活細胞和死細胞,EB隻能對喪失膜完整性的細胞進行染色。活細胞呈均勻的綠色。早期凋亡細胞呈綠色,並且在細胞核能看到亮綠色的點,由於染色體濃縮和核斷裂。晚期凋亡細胞也會被EB著色,從而染成橙紅色,但,與壞死細胞相比,晚期凋亡細胞會有濃縮和常常斷裂的核。壞死細胞也被染成橙紅色,但會有和活細胞相似的核形態,沒有濃縮的染色體。

我司(香蕉视频app官网生物)提供的AO/EB雙染試劑盒(AO/EB Double Staining Kit)提供完整的試劑,操作簡單,根據說明書操作能做100個反應。

 

產品包裝

編號

組分名稱

保存方法

貨號(規格

MX3233-20T

MX3249-A

AO Stain Solution 吖啶橙染液

4℃避光

200μl

MX3249-B

EB Stain Solution 溴化乙錠染液

4-25℃避光

200μl

MX3249-C

Dilution Buffer 稀釋緩衝液

4℃避光

50ml

 

注意事項

1)AO與EB都有一定毒性,請小心操作。

2)為了您的安全和健康,請穿實驗服並戴一次性手套操作。

 

使用方法

1. 染色工作液的製備

於正式實驗前,取吖啶橙染液(試劑A)、溴化乙錠染液(試劑B)、稀釋緩衝液(試劑C),按照A:B:C=1:1:8的比例稀釋成所需的AO/EB染色工作液

2. 細胞準備

貼壁細胞:按照常規方法消化。於1000rpm離心5min,收集細胞沉澱,用PBS清洗一次。

懸浮細胞:於1000rpm離心5min,收集細胞沉澱,用PBS清洗一次。

之後用稀釋緩衝液(試劑C)重懸細胞,細胞計數,調整細胞密度為0.5-5×106個/ml。

3. 染色

每25μl細胞懸液中,加入2μl 新鮮製備的AO/EB染色工作液,輕輕混合均勻。室溫孵育5~10min。

4. 觀察

取幹淨載玻片,滴加5~10μl 染色的細胞懸液,蓋上蓋玻片。使用熒光顯微鏡的熒光素濾片和60倍放大的物鏡來觀察和計數。該測定至少重複三次,每次觀察的總細胞至少100個。

【注意】:根據細胞類型選擇理想的物鏡放大倍數(更高或更低),前提是必須看清核形態。

應用示例(來自文獻):

文獻:Dual AO/EB Staining to Detect Apoptosis in Osteosarcoma Cells Compared with Flow Cytometry.

染色方法:Dual fluorescent staining solution (1 μl) containing 100 μg/ml AO and 100 μg/ml EB (AO/EB) was added to each suspension and then covered with a coverslip. The morphology of apoptotic cells was examined and 500 cells were counted within 20 min using a fluorescent microscope (OLYMPUS). Dual acridine orange/ethidium bromide (AO/EB) staining method was repeated 3 times at least.

 

Fig. (A) 陰性對照細胞(正常細胞):環形細胞核均勻分布在細胞中央。(B)實驗組 (早期凋亡細胞): 吖啶橙(AO)染色後的細胞核呈黃綠色熒光,以月牙形或顆粒的形態聚集位於細胞的一邊。(C) 實驗組 (晚期凋亡細胞): 經EB染色後的細胞核呈橙紅熒光,集中聚集且偏重定位。(D) 壞死細胞:壞死細胞體積增加,顯示平整的橙紅色熒光和不清晰的輪廓。細胞正要溶解或接近崩潰。

 

相關產品

貨號

名稱

規格

MF0756-1G

Ethidium Bromide (EB) 溴化乙錠

1g

MF0756-5ML

EB (10 mg/ml in Water) EB水溶液(10 mg/ml)

5ml

MX4217-250MG

Acridine Orange Hydrochloride 吖啶橙鹽酸鹽

250mg

MX4230-5G

Acridine Orange hemi(zinc chloride) salt 吖啶橙半氯化鋅鹽

5g

MX3249-100T

AO/EB Double Staining Kit AO/EB雙染試劑盒

100T

MX3250-100T

Hoechst 33258/PI Double Stain Kit 細胞凋亡雙染試劑盒

100T

MX3201-100T

Hoechst 33342/PI Double Stain Kit 細胞凋亡雙染試劑盒

100T

 

 

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AO/EB雙染試劑盒

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